熒光定量PCR儀在國內市場推廣從98年開始已經(jīng)經(jīng)歷了6年，從開拓者PE（ABI）到ROCHE,再到后來魚龍混雜

                所謂real-time Q-PCR技術，是指在PCR反應體系中加入熒光基因，利用熒光信號累積實時監(jiān)測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。

實時熒光定量PCR儀 采購要領！

        目前購買熒光定量PCR儀系統(tǒng)，一般包括：

        實時熒光定量PCR儀 +實時熒光定量PCR儀 開機檢測試劑+通用電腦+自動分析軟件  

        熒光定量PCR儀 組成：溫控模塊、光學系統(tǒng)（光源、檢測器、光路傳導） 

采購要領

1、 溫控模塊/Peltier：

       普通的Peltier加熱方式具有明顯邊緣效應，均一性差，是上一代的模塊PCR加熱技術，正處于被淘汰的邊緣。

       目前最好的溫控模塊：銀，在金屬中銀的導熱性能較高，升降溫速度快，孔間溫度均一性好，邊緣效應相應減少

         金屬的熱傳導系數(shù)表： 

         銀 429 ＞銅 401 ＞ 金 317 ＞鋁 237  ＞鐵 80 ＞錫 67  ＞ 鉛 34.8

另：

       單一模塊升降溫速度高并不代表樣本升降溫速度也高，因此在溫控模塊升降溫速度對比中，最終是要看樣本的升降溫速度是否快

       最大升降溫速度不等與平均升降溫速度

2、  光源：

       光強比較：髙強度白光LED ＞ 鹵鎢燈 ＞單色LED

       白光LED的亮度約是鹵鎢燈的3倍左右，單色LED的10倍左右，能夠捕捉到更多的熒光信號，是專業(yè)光源領域的最新技術代表，2011年開始普遍應用于專業(yè)儀器，無論光強、靈敏度與均一性可與上一代氙燈光源媲美，且壽命提升了10倍以上。

鎢燈燈絲本身存在閃爍不穩(wěn)定的問題，其激發(fā)能量遠低于白光LED，事實上，無需高端品牌汽車的旗艦概念車，如豐田雷克薩斯，已經(jīng)開始使用白光LED作為車頭燈。

       壽命比較：髙強度白光LED = 單色LED  ＞鹵鎢燈

       白光LED的壽命長達10000小時以上，一般可以使用5-10年左右，基本上超過了一般科研儀器的正常工作壽命，基本終身無需更換光源，而鹵鎢燈光源基本每2年就要更換一次，費時費力，南方更是不足一年就要更換一次

另：

鹵鎢燈每次運行需要半小時預熱，其中累計散發(fā)的熱量對熒光具有明顯的淬滅作用。

3 、 檢測器：

 熒光定量PCR靈敏度：冷CCD ＞CCD ＞光電倍增管 CPM  ＞光電二極管

        CCD作為熒光信號的接受器，其質量直接決定了儀器的檢測靈敏度和穩(wěn)定性。

10℃的冷CCD，和常溫CCD有著質的區(qū)別，在專業(yè)光學領域，冷CCD的造價成本至少要比常規(guī)CCD高出一倍以上。冷CCD在更低的溫度下進行光信號捕捉，能夠提供更高的光感靈敏度和更低背景噪音。因此，有的熒光定量PCR能夠穩(wěn)定區(qū)分1000和2000拷貝的濃度差異，而有的只能做到區(qū)分5000和10000個拷貝數(shù)。

4 、光路傳導：：

         光路的傳導 光路設計應盡可能有效消除邊緣效應，光路設計是否有效消除邊緣效應，只有實驗才能檢驗

         檢驗方法：96/384孔板中及四角各布置標準品，看差異

         其中     

         a 光源直接照射微孔板上：邊緣效應明顯

         b 逐孔移動式采光：無邊緣效應，但需時常校正 

         c 散射采光：邊緣效應較明顯，切換光源時需要光源組件移動